What is ELISA? (정의, 원리, 종류 등 특징)

1.ELISA의 정의 및 기본 원리

ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent assays)

효소 면역 정량법은 생물학적 샘플의 단백질, 펩타이드, 호르몬 또는 화학물질의 수준을 측정하는 항체 기반 기술이다. 

항체에 효소를 결합시켜 항원-항체 반응을 확인하는 정량법으로 진단 산업에서 가장 널리 사용되는 면역학적 방법 중 하나이다.  ELISA는 정성 분석 및 정량 분석을 통해 분석물을 검출한다. 실험방법이 간단하고 비용이 저렴하며 한 번에 다량 분석이 가능하다는 장점이 있다.

주로 96well plate의 표면에 1) antigen을 부착시켜 표면에 고정, 2) 분석하고자 하는 sample을 추가해 complex형성, 3) Incunation, 4) 검출 단계로 이루어진다.

1) Coating/Capture : direct or indirect of antigens to the surface of polystyrene microplate wells.

2) Plate Blocking : addition of irrelevant protein or other molecule to cover all unsaturated surface-binding sites of the microplate wells.

3) Probing/Detection : incubation with antigen-specifuc antibodies that affinity-bind to the antigens.

4) Signal Measurement : detection of the signal generated via the direct or secondary tag on the specific antibody.

 

2.ELISA의 종류

 

 

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1) Direct ELISA

항원과 반응하는 항체에 바로 효소를 결합시켜 사용하는 방법

2) Indirect ELISA

항원과 결합하는 항체(1차항체, Primary antibody)에는 효소가 없고, 그 항체와 결합하는 2차 항체(Secondary antibody)에 효소가 결합되어있는 분석방법이다. 일반적으로 isotope에 대한 항체 효소가 결합된 형태(enzyme cojugated anti-isotype antibody)로 판매된다. ex) alkaline phosphatase conjugated anti-mouse IgG

3) Sandwich ELISA

항원에 대한 항체를 먼저 플레이트에 결합시키고, 그 항체에 항원을 결합시킨 다음 직접법이나 간접법으로 조사하는 방법이다. 주로 항원이 양이 적을 때, 혹은 미지의 샘플에 들어있는 항원을 조사할 때 사용한다.

두 개의 항원-특이적 항체가 요구된다. 민감도가 높아 가장 널리 사용되는 분석법이다.

4) Competitive ELISA

항체의 같은 결합 부위에 대한 2가지 항원 간의 경쟁에 의해 이루어진다. 2가지 항원은 동위원소나 효소에 의해 표지된 항원과, 표지되지 않은 항원이다. Competitive ELISA는 합텐*의 검출에 적합하다.

합텐 : 단독으로는 면역반응을 일으켜 항체를 생성할 수 없으나 단백질과 같은 거대분자에 붙어 면역반응을 일으키는 작은 분자

TypeAdvantagesDisadvantagesCommonanalytes

A.Direct ELISA	● No cross-reactivity from secondary antibody	● No signal amplification	Antigen
B.Indirect ELISA	● Higher signal to noise ratio	● Relatively complex protocol	Antigen, Antibody
C.Sandwich ELISA	● Higher sensitivity	● Take considerable time to develop	Complex antigen
D.Competitive ELISA	● Good sensitivity	● needs the use of reference antigen	Small antigen

http://www.bionicsro.co.kr/rmnbnpeptideElisa

3.ELISA 분석의 예시

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KOMA Cytokine ELISA Kit

Human , Mouse, Rat 의 biological sample에 존재하는 cytokine의 양을 측정하는 ELISA kit.

일반 ELISA kit은 무색의 시약을 사용하는 반면, pink-ONE ELISA kit은 핑크빛을 띠는 pink-ONE TMB와 Diluent를 사용함으로써, 시약 처리시 발생할 수 있는 파이펫팅의 실수를 줄여준다.

• Serum을 포함하여, CSF, plasma등 각종 biological 샘플에서의 cytokine을 측정할수 있습니다.
• Human, Mouse Rat 샘플에서의 다양한 cytokine을 정량할수 있습니다.
• 핑크빛을 띠는 Assay Diluent에 희석함으로서, 파이펫팅시 시약의 로딩위치를 알수 있습니다.
• 핑크빛을 띠는 pink-ONE TMB는 기존의 무색 TMB에 비해 로딩시 색상으로 구분이 되므로 파이펫팅 실수를 줄여줍니다.
• pink-ONE TMB는 이미 substrate와 buffer가 혼합되어 있어, 사용전 mixing 할 필요가 없어 간편합니다.
• 96well 샘플의 정량에 필요한 시약과 버퍼 및 항체가 코팅된 plate가 제공됩니다.
• 각 구성품들은 ELISA에 최적화 되어 있습니다.

제품 구성

• Affinity purified antibody pre-coated 96 well ELISA microplate
• Biotinylated affinity purified detection antibody
• Lyophilized standard protein
• Lyophilized color development enzyme (Streptavidin-HRP conjugate)
• pink-ONE Assay Diluent
• Substrate (pink-ONE TMB)
• Stop solution
• Wash Buffer
• Plate sealer

 

 

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